GFP熒光蛋白激發(fā)光源應(yīng)用案例
熒光蛋白激發(fā)光源應(yīng)用于植物和動(dòng)物研究實(shí)驗(yàn)室，為廣大動(dòng)植物研究的科研工作者帶來(lái)了諸多的便利，以下為熒光蛋白激發(fā)光源常見(jiàn)應(yīng)用：
1、有時(shí)候，研究者們需要對(duì)小鼠的伏隔核進(jìn)行穿孔，以便進(jìn)一步生化分析。如果能觀測(cè)到共轉(zhuǎn)染的熒光，就能很容易找到正確的穿孔部位。研究者們就可以用LUYOR-3260RB單熒光蛋白觀測(cè)手電筒來(lái)觀測(cè)熒光，從而找到正確穿孔位置的。研究者從小鼠大腦中提取GFP標(biāo)記的背紋體。他們把這比喻成：從一個(gè)大一點(diǎn)的燕麥片中分離出一塊小的燕麥片，這是很困難的。但是他們用的單熒光蛋白觀測(cè)手電筒LUYOR-3430RB，就很容易看到大腦中的目標(biāo)區(qū)域，從而讓解剖更準(zhǔn)確。
2、用LUYOR-3430RB單熒光蛋白觀測(cè)手電筒，可以很快的檢測(cè)樣本是否染色（Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記）成功。
3、用于結(jié)核分枝桿菌重組株的篩選，在結(jié)核分枝桿菌中成功構(gòu)建了高效同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構(gòu)建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)、pstP胞外區(qū)三個(gè)突變株,得到雙交換突變株的效率為25％ -62.5％,從雙交換突變株得到無(wú)痕缺失突變株的效率為100％.通過(guò)gfp作為熒光標(biāo)記基因,利用LUYOR-3430RB GFP激發(fā)光源和LUV-30A熒光觀測(cè)眼鏡,可以對(duì)平板上的基因缺失株直接進(jìn)行快速判定。
熒光蛋白激發(fā)光源激發(fā)出綠色熒光時(shí)，用LUV-30A黃色濾光鏡觀測(cè)，可檢測(cè)含綠色熒光蛋白（GFP）的生物；激發(fā)光源激發(fā)紅色熒光時(shí)，用LUV-50A紅色濾光鏡觀測(cè)，可檢測(cè)含紅色熒光蛋白（DsRed）的生物。更多熒光蛋白激發(fā)光源用于檢測(cè)、篩選轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）和紅色熒光蛋白（DsRed）基因的植物、動(dòng)物及微生物，如水稻、玉米、斑馬魚(yú)、小鼠、細(xì)：菌、真菌等等，請(qǐng)咨詢上海峰志儀器有限公司。
RFP熒光蛋白在老鼠上的表達(dá)
上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)美國(guó)nightsea、美國(guó)路陽(yáng)生產(chǎn)的熒光蛋白激發(fā)光源、GFP激發(fā)光源、熒光蛋白激發(fā)觀測(cè)燈、熒光蛋白體視顯微鏡熒光適配器、熒光蛋白觀測(cè)眼鏡，請(qǐng)根據(jù)網(wǎng)頁(yè)底部聯(lián)系方式聯(lián)系網(wǎng)頁(yè)底部.
GFP激發(fā)光源在細(xì)胞生物學(xué)的應(yīng)用
GFP激發(fā)光源在細(xì)胞生物學(xué)的應(yīng)用具有易于檢測(cè)、熒光穩(wěn)定、廣譜性、易于載體構(gòu)建、無(wú)毒害諸多優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)樵谏飳W(xué)應(yīng)用廣泛，上海峰志儀器有限公司銷售的GFP激發(fā)光源為你簡(jiǎn)單整理10個(gè)應(yīng)用：
1、對(duì)細(xì)胞生理過(guò)程監(jiān)控
通過(guò)基因操作，蛋白與不同GFP進(jìn)行融合，形成融合蛋白。通過(guò)融合蛋白在激發(fā)光源的照射下發(fā)出熒光特制，可以對(duì)相應(yīng)蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)運(yùn)以及生理反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)控。監(jiān)控主要有：轉(zhuǎn)移和定位、GFP光譜的生化修飾、熒光共振的能量轉(zhuǎn)移。
2、細(xì)胞篩選
基于GFP能夠吸收并在激發(fā)光源照射下發(fā)出熒光，并且熒光穩(wěn)定以及檢測(cè)方法快速、方便的特性，GFP在細(xì)胞篩選上廣泛應(yīng)用。如：應(yīng)用流失細(xì)胞計(jì)數(shù)儀來(lái)篩選蛋白產(chǎn)量增強(qiáng)的細(xì)胞；使用GFP作為標(biāo)記快速篩選出在生長(zhǎng)抑制環(huán)境下仍能保持重組蛋白大量表達(dá)的CHO細(xì)胞；通過(guò)GFP熒光的減少，可以檢測(cè)出鼠和人細(xì)胞的凋亡；利用GFP融合細(xì)胞作為細(xì)胞表面活體熒光標(biāo)記，通過(guò)篩選已經(jīng)獲得GFP表達(dá)的E.coli、人體腎細(xì)胞和猿猴COS-1細(xì)胞燈特殊類型。
3、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)分子的定位
相對(duì)于以前使用細(xì)胞分級(jí)分離和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)研究蛋白質(zhì)移位，現(xiàn)在使用GFP融合蛋白顯像技術(shù)更簡(jiǎn)便且可靠，既能更快又能更全面的對(duì)蛋白質(zhì)的移動(dòng)進(jìn)行研究。如：對(duì)幾個(gè)GFP突變體的檢定，通過(guò)激發(fā)光源激發(fā)不同熒光，從而在活細(xì)胞中準(zhǔn)備的區(qū)分多種不同熒光融合蛋白并了解他們的分布情況。
4、用于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的動(dòng)力學(xué)研究
研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)主要有：光漂白熒光恢復(fù)法（FRAP）、光漂白熒光損失法(FLIP)。FRAP主要是通過(guò)對(duì)細(xì)胞內(nèi)特定的點(diǎn)或區(qū)域進(jìn)行強(qiáng)烈的光照，使熒光發(fā)生光跑白作用，再通過(guò)相同時(shí)間間隔的光影像采樣記錄下熒光恢復(fù)的動(dòng)力學(xué)過(guò)程。FLIP是對(duì)細(xì)胞的一個(gè)區(qū)域進(jìn)行持續(xù)性的光漂白，再對(duì)光漂白區(qū)外的熒光的損失進(jìn)行監(jiān)控就可獲得一些標(biāo)記蛋白之間的相關(guān)性信息。另外一種可以用來(lái)研究細(xì)胞內(nèi)返傭動(dòng)力學(xué)的方法就是熒光相關(guān)性分光光鏡檢查。
5、計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)速度
在高水平組合型表達(dá)GFP的細(xì)胞品系中，在細(xì)胞生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期。綠色熒光蛋白激發(fā)后所發(fā)出的熒光信號(hào)與細(xì)胞的數(shù)量密切相關(guān)。測(cè)量到的任何熒光強(qiáng)度都可以相應(yīng)地轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞濃度。盡管在細(xì)胞生長(zhǎng)的后期，用熒光信號(hào)計(jì)算得到的細(xì)胞數(shù)目略低于培養(yǎng)物種的實(shí)際數(shù)目。但在常用的臺(tái)盼藍(lán)技術(shù)方法中，這些誤差是允許的。利用這一技術(shù)，可以測(cè)定某些細(xì)胞的分布和生長(zhǎng)狀況，尤其是一些透明的動(dòng)植物組織內(nèi)特定細(xì)胞、化合物的生長(zhǎng)、分布情況。也有人用此項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行病毒在植物體內(nèi)的生長(zhǎng)、擴(kuò)散情況的研究，取得了不錯(cuò)的效果。
6、觀察細(xì)胞內(nèi)酶的活動(dòng)
GFP不僅可以用來(lái)探測(cè)融合蛋白的空間定位，而且可以對(duì)活細(xì)胞的酶活動(dòng)，如：磷酸化作用、蛋白水解作用燈進(jìn)行報(bào)告，還可測(cè)量與酶活動(dòng)相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)的pH、cAMP、Ca2+濃度。通過(guò)將外源系列插曲GFP基因中，可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)酶的活動(dòng)進(jìn)行觀察以及了解這些酶的生理學(xué)參數(shù)。插入外源基因后所表達(dá)的融合蛋白中的GFP蛋白發(fā)色基團(tuán)會(huì)發(fā)生構(gòu)像改變，其發(fā)射的熒光的強(qiáng)度發(fā)生很大的變化。這些指示劑可以用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)許多酶的作用。例如：蛋白水解酶、激酶、氧化還原酶以及一些小配基的濃度。
7、用于細(xì)胞示蹤實(shí)驗(yàn)研究
利用GFP的激發(fā)后發(fā)出熒光可以清楚地對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移進(jìn)行追蹤。體內(nèi)腫瘤侵襲的研究要求在周?chē)＜?xì)胞背景下，能識(shí)別少量甚至是單個(gè)的瘤細(xì)胞。
8、基因表達(dá)調(diào)控
GFP作為一種活體報(bào)告蛋白，用于研究基因表達(dá)的調(diào)控，易于會(huì)提觀測(cè)和檢測(cè)。
9、定量分析
GFP的熒光強(qiáng)度很高，很容易用一起定量檢測(cè)，而且研究表明GFP的熒光強(qiáng)度與其相連的細(xì)胞或蛋白有一定的相關(guān)性，只需要作出一條相關(guān)性曲線，就可以對(duì)研究隊(duì)形進(jìn)行定量的分析。
10、DFP報(bào)告蛋白用于細(xì)胞活體分離與純化
利用細(xì)胞表面標(biāo)記，通過(guò)流體細(xì)胞分光光度計(jì)或熒光活化細(xì)胞篩選儀可以分離與純化特殊類型細(xì)胞，對(duì)分析cDNA文庫(kù)、研究基因的細(xì)胞發(fā)育或組織專一性表達(dá)十分重要。利用GFP融合蛋白為細(xì)胞表面活體熒光標(biāo)記，通過(guò)篩選已經(jīng)獲得GFP的表達(dá)的大腸桿菌、人體腎細(xì)胞和猿猴COS-1細(xì)胞特殊類型。
上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)各種熒光蛋白激發(fā)光源（GFP、eGFP、BFP、CFP、YFP、RFP、Dsred、Mcherry），能夠觀測(cè)綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、紅色熒光蛋白等在種子、愈傷組織、葉片等上的表達(dá)，便攜式GFP激發(fā)光源能夠在實(shí)驗(yàn)室、溫室大棚、試驗(yàn)田等地方直接觀測(cè)熒光蛋白的表達(dá)，請(qǐng)根據(jù)網(wǎng)頁(yè)底部聯(lián)系方式聯(lián)系：138-1868-3556，聯(lián)系人：張小姐。
熒光蛋白GFP的應(yīng)用
熒光蛋白GFP在激發(fā)光源的照射下，人眼能明顯的看到熒光，而一起被廣泛應(yīng)用于各種生物研究，主要特性如下
1、易于檢測(cè)
GFP熒光反應(yīng)不需外加任何反應(yīng)底物，酶或其他共反應(yīng)銀子，也就不存在這些物質(zhì)可能難于進(jìn)入細(xì)胞的問(wèn)題，只需紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)，即可發(fā)出綠色熒光，GFP發(fā)射的熒光用LUV-30A熒光觀測(cè)眼鏡或用熒光顯微鏡就可以檢測(cè)到。靈敏度高，對(duì)于單細(xì)胞水平的表達(dá)也可識(shí)別，同時(shí)還可利用其進(jìn)行定量檢測(cè)。由于GFP對(duì)活細(xì)胞基本無(wú)毒害，因此無(wú)需特殊處理就可以很方便進(jìn)行活體觀察。而且，具有不同光譜特性的GFP突變體的獲得，使在同一細(xì)胞中同時(shí)分析兩種不同蛋白或啟動(dòng)子成為可能，可以用于法語(yǔ)細(xì)胞學(xué)、藥物篩選、分析診斷燈研究。這就使GFP有可能成為一種快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的標(biāo)記蛋白，GFP基因作為報(bào)道基因有很廣泛的應(yīng)用。
2、熒光穩(wěn)定
GFP無(wú)光漂白現(xiàn)象，在很大PH范圍內(nèi)（PH7-12）都可以正常發(fā)出熒光，手溫度的影響也很小，只有在超過(guò)65℃時(shí)才會(huì)變性，即熒光消失。熒光顯微鏡強(qiáng)光照射下，GFP抗光漂白能力比熒光素強(qiáng)，特別是在450~490nm藍(lán)光波長(zhǎng)下更穩(wěn)定，單在340-390nm或395-440nm范圍內(nèi)，仍會(huì)發(fā)生光漂白現(xiàn)象。對(duì)于長(zhǎng)時(shí)間光照，GFP也有很好的耐受性，根據(jù)Sheen等的研究，GFP在受體內(nèi)表達(dá)時(shí)可以持續(xù)得到不低于10min的熒光。
3、廣譜性
首先表現(xiàn)在它的表達(dá)幾乎不受種屬范圍的限制，在微生物、植物、動(dòng)物中都獲得了成功的表達(dá)；其次就是沒(méi)有細(xì)胞種類和位置的限制，在各個(gè)部位都可以表達(dá)，在紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)下發(fā)出肉眼可見(jiàn)的熒光。
4、易于載體構(gòu)建
由于GFP較小，只含有238個(gè)氨基酸，編碼GFP的基因序列也比較短，約2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起構(gòu)建多種質(zhì)粒，而不至于使質(zhì)粒過(guò)大影響轉(zhuǎn)化頻率。盡管野生型的GFP在某些植物和動(dòng)物中表達(dá)很弱，但是可以通過(guò)更換GFP生色團(tuán)氨基酸改變堿基組分、出去內(nèi)含子、更換強(qiáng)啟動(dòng)子燈方法加強(qiáng)表達(dá)。Connack等篩選出三種含Ser65突變的突變體，在大腸桿菌中表達(dá)時(shí)，紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)下的熒光強(qiáng)度比野生型高約100倍。
5、無(wú)毒害
Chalfie等的研究表明：GFP對(duì)生活細(xì)胞基本無(wú)毒害，Sheen等的研究進(jìn)一步表明：在玉米中，即便GFP在細(xì)胞中的表達(dá)量很高時(shí)，對(duì)細(xì)胞也不會(huì)產(chǎn)生明顯毒害，但是至今我們還不了解它對(duì)植物再生能力的影響。
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